COMENTARIO

Se han utilizado diferentes métodos moleculares para detectar la presencia de mutaciones que confieren resistencia a claritromicina en H. pylori. Estas técnicas se han utilizado generalmente sobre el aislamiento obtenido por cultivo y también sobre muestras de biopsia gástrica obtenido mediante endoscopia digestiva. En este estudio aplican una técnica molecular para detectar resistencia a claritromicina a partir de muestras de heces de pacientes infectados por H. pylori.
Estudiaron un total de 283 muestras de heces de pacientes a los que les realizó endoscopia digestiva con toma de muestra para cultivo y posterior realización de pruebas de sensibilidad mediante dilución en agar. 125 pacientes fueron positivos para H. pylori.
La extracción del ADN a partir de muestras de heces se realizó con un método de extracción comercial: QIAamp DNA stool minikit (Qiagen).
Desarrollaron un nuevo método, una PCR semi-anidada, que amplifica un fragmento de 783pb, que posteriormente es digerido con MboII, BsaI y HhaI y permite detectar las mutaciones descritas hasta ahora que confieren resistencia a claritromicina. La secuencia se confirmó mediante secuenciación del fragmento completo.
Se obtuvo el fragmento amplificado en los 125 pacientes en los que el cultivo fue positivo, No se obtuvo fragmento amplificado en los que el cultivo fue negativo. En las muestras negativas por PCR se comprobó que no existían inhibidores mediante amplificación del gen de la beta-actina.
El análisis de restricción demostró que dos cepas presentaron la mutación en la posición 2717 y sin embargo, no encuentran mutaciones en la posición 2142 o 2143. Los resultados fueron concordantes con los obtenidos mediante pruebas de sensibilidad: ninguna cepa presentó alto nivel de resistencia a claritromicina y dos cepas presentaron una CMI de 1 mg/l.
El sistema de detección de resistencia a claritromicina mediante PCR a partir de muestras de heces, descrito en este estudio, parece ser fácil de realizar y permite dar información sobre la sensibilidad a macrolidos a partir de muestras obtenidas por técnicas no invasivas.